Recolección de Materia Fecal en Conservantes
Formol al 10 %
Solución merthiolate-iodo-formaldehido (MIF)
Solución de acetato de sodio - ácido acético – formaldehído (SAF)
Solución fijadora de alcohol polivinílico (PVA)
Fijador de
Schaudinn
Solución de dicromato de potasio
Tabla comparativa
La materia fecal puede recolectarse en diferentes conservantes. Los mismos se utilizan cuando las muestras no se pueden procesar inmediatamente después de su eliminación, para facilitar su transporte y para ser conservadas por varios meses. El uso de estas soluciones permite conservar la morfología de protozoarios y previene el desarrollo de huevos y larvas. Las soluciones conservantes son las siguientes:
Formol al 40 % 250 ml
Agua destilada csp 1000 ml
Solución I (solución MF)
Glicerina 2 ml
Formaldehído 10 ml
Tintura de merthiolate 1:1000ml. 80 ml
Agua destilada 100 ml
Solución II (solución de iodo-lugol)
Iodo cristales 5 g
Ioduro de potasio 10 g
Agua destilada 100 ml
El ioduro de potasio se disuelve en agua y el iodo es adicionado lentamente hasta su completa disolución. Se filtra y se mantiene la solución en frasco ámbar.
Acetato de sodio 1.5 g
Ácido acético glacial 2.0 ml
Formaldehído 40% 4.0 ml
Agua destilada 92.5 ml
PVA (polvo) 10 g
Etanol 95% 62.5 ml
Cloruro de mercurio, sol.acuosa saturada 125 ml (ver fijador de Schaudinn)
Ácido acético glacial 10 ml
Glicerina 3 ml
Mezclar los ingredientes líquidos en un vaso de precipitado adecuado al volumen a preparar. Agregar el polvo de PVA. Cubrir el vaso con papel encerado grueso o metálico y dejar remojar durante toda la noche. Calentar lentamente la solución hasta 75 ºC, cuando se alcance dicha temperatura retirar el vaso y agitar la mezcla hasta obtener una solución homogénea ligeramente lechosa (30 segundos). El PVA permanece estable durante largos períodos de tiempo (meses o años) en recipientes cerrados.
Cloruro de mercurio saturado
Cloruro de mercurio (HgCl2) 110 g
Agua destilada 1000 ml
Hervir la dilución a baño maría hasta que se disuelva el cloruro de mercurio. Dejar reposar hasta que se formen cristales.
Fijador de Schaudinn (solución stock)
Cloruro de mercurio, solución acuosa saturada 600 ml
Alcohol etílico, 95% 300 ml
Inmediatamente antes de su uso agregue ácido acético glacial, 5 ml por 100 ml de solución stock.
Dicromato de potasio 2.5 g
Agua destilada 100 ml.
Se conserva en frasco color caramelo.
Es importante tener en cuenta las ventajas y desventajas de cada fijador; la mayoría de los laboratorios seleccionan varios métodos diferentes, diseñado cada uno de ellos para un propósito específico. Por ejemplo: la elección del conservante depende de la posibilidad de realizar frotis para coloraciones permanentes y un examen completo de los especimenes. También es importante recordar que si se eligen compuestos mercuriales, debe existir una adecuada eliminación de los mismos.
| Conservante |
Ventajas |
Desventajas |
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Formol al 10 % |
* Fijador
multipropósito: buen conservante de la morfología de huevos de helmintos,
larvas, quistes de protozoos y coccidios. * Fácil preparación. * Larga duración. * Adecuado para las técnicas de concentración y de la microscopía de epifluorescencia. * Adecuado para coloración ácido-alcohol resistentes (safranina) y Tricrómica modificada. * Compatible con inmuno-ensayos. |
* Inadecuado para
preservar la morfología de trofozoitos como los de Entamoeba
histolytica. * No es aconsejado para algunas coloraciones permanentes como tricrómica (TC). * Puede interferir con PCR, especialmente luego de un tiempo prolongado de fijación. * Puede interferir con la capacidad tintorial de Ciclospora cayetanensis y microsporidios intestinales. |
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MIF |
* Los componentes
fijan y colorean al mismo tiempo. * Fácil de preparar. * Útil para trabajos de campo. * Vida media prolongada. * Adecuado para técnicas de concentración. |
* No es aconsejado
para coloraciones permanentes como TC. * Conservante inadecuado para la morfología de trofozoitos. * El iodo interfiere con técnicas que utilizan colorantes de fluorescencia y puede distorsionar a los protozoos. |
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PVA
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* Buen conservante
de la morfología de trofozoitos y quistes. * Fácil preparación de frotis para coloraciones permanentes (la solución preserva los organismos y los adhiere al preparado). * Vida media larga a temperatura ambiente. * Las muestras conservadas permanecen estables por varios meses. |
*Inadecuada
conservación de la morfología de huevos, larvas, coccidios y microsporidia. * Contiene compuestos mer-curiales. *Difícil de preparar en el laboratorio y difícil y caro de eliminar. * Menos aplicable para técnicas de concentración. * No es compatible con inmunoensayos. * No es adecuado para coloraciones como safranina |
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SAF |
* Fácil
preparación. * Fijador multipropósito. * Adecuado para concentración y preparación de coloraciones permanentes. * Vida media larga. * Compatible con coloraciones como TC y safranina. * Compatible con técnicas de inmunoensayos. |
* Requiere aditivos
como albúmina – glicerina para la adhesión de las muestras al portaobjeto
(albúmina de Mayer). * Coloraciones permanentes como TC no son tan buenas como las realizadas en PVA. |
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Solución de dicromato de potasio |
* Útil para el
estudio de coccidios. * Apropiado para la esporulación. * Impide el crecimiento bacteriano. |
* No es fijador. |
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Fijador de Schaudinn |
* Buena
conservación de la morfología de trofozoitos y quistes. * Fácil preparación de frotis para coloraciones permanentes. |
* Poco adecuado
para técnicas de concentración. * Contiene componentes mercuriales. * Inadecuada conservación de la morfología de huevos, larvas, coccidios y microsporidia. * Escasa adhesión de muestras mucosas o diarreicas a portaobjetos. |
| PVA modificado ( cobre o zinc) |
* Se pueden hacer
frotis permanentes y teñidos con TC. * Se prefieren las soluciones con zinc por encima de las cúpricas. *No contiene compuestos mercuriales. |
* La coloración no
es consistente. * No es buena la morfología que se observa con ambas soluciones y no es comparable con la obtenida con PVA. |